±3.55%),而与辐照小鼠进行比较抗Ly-6G抗体处理后的PD-1 表达没有变化小鼠。因此,在这部分我们建议PMN-MDSCs 通过抑制CD8 + T 细胞促进放疗后肿瘤的再生。PMN-MDSCs 不仅抑制了TME 中 CD8 + T 细胞的数量,而且还抑制了其活性。
为了确定辐照诱导MDSCs的抑制机制,我们进行了免疫组化染色及iNOS和ARG1活性检测。肿瘤切片的免疫组化染色显示,局部RT增强了ARG1的表达,但没有增强iNOS的表达。ARG1活性测定表明,局部照射显著提高了ARG1的活性,从0.400.15 U/L提高到3.78 0.39 U/L ((P<0.01)。相比之下,NO荧光标记的iNOS活性检测显示,辐照和未处理的肿瘤组织样本的荧光强度相似。
PD-L1的表达是MDSCs 的一种新型免疫抑制机制。然后我们询问PD-L1 上调是否是RT 后 MDSCs 介导的免疫抑制的机制之一。通过流式细胞术分析辐照后MDSC 中 PD-L1 的表达。图4E 显示,与未处理组相比,受照射肿瘤的MDSC 中的PD-L1 表达在照射后不久显着增加(照射后第三天:ctrlvs. RT=443.9 ±175.3 au vs. 1328.0 ±324.3 au,P<0.05).然而,此后PD-L1表达继续下降,局部照射组在照射后第3周显着低于未治疗组(ctrl vs. RT=1,465.0± 399.6 au vs. 407.5±164.8 au,P<0.05)。外周血中MDSCs 的 PD-L1 表达与局部肿瘤部位的表达趋势相同。
以上数据表明ARG1表达的上调是照射后PMN-MDSCs抑制功能的合理机制。然而,不涉及 PD-L1 和 iNOS的调节。为了进一步证实这一假设,在辐射后通过灌胃给予ARG1 抑制剂nor-NOHA。10 mg/kg/d nor-NOHA 有效地将ARG1 活性从3.78 0.39 U/L 降低到2.02 0.25 U/L(P<0.01)。
RT后给予nor-NOHA显着增加CD8+T细胞比例(RT vs. RT+nor-NOHA=2.420.62% vs. 6.14 0.64, P<0.01),并伴有肿瘤再生延迟。iNOS抑制剂1400W 对肿瘤再生长没有影响。
我们的结果
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